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2018年5组三中三资料

发布时间:2018-09-22 来源:123全年历史图库大全

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责编:乌温文

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点击次数:115 发布时间:2018-09-22

牛垂体提取物的技术原理及使用方法

  如果培养条件不变,以添加成分中不含牛脑垂体提取物的MCDB153的培养液培养角朊细胞,那么角朊细胞停止增殖,逐渐脱落。Boyce等。指出,牛垂体提取物对角朊细胞的原代培养,冻存和复苏至关重要。牛脑垂体提取物具有强致有丝分裂的作用,进行角朊细胞的无血清培养,培养基及添加剂的成分能否满足角朊细胞生长的需要,是培养成功的关键,适当浓度的表皮生长因子和牛脑垂体提取物支持角朊细胞的生长增殖,并抑制其分化,浓度过高或过低都不利于其生长。
 
  牛垂体提取物高有丝分裂活性,一致的高活性生长因子和激素来源新西兰品种,采购文档支持,立即可用,无菌液体。角朊细胞的分离,采用中性蛋白酶及胰蛋白酶联合消化,分离角朊细胞。具体步骤如下,取包皮环 切术切除的成人包皮,切成约015c m ×015c m 皮块,用含青霉素 (10万 U L ) 、 链霉素 (100m g L ) 的 D -H ank s 液洗 3次,加入中性蛋白酶 (D isp ase :200U m l ) , 在 4℃下,消化 18~20h分离真。表皮,表皮部分再用 0及 011%的 ED 5后 , D S 培养基 200, 1500r m in 5in , , 加入 PB S 液,重 复洗细胞 3次 , 计数细胞。角朊细胞的培养,将体外分离的细胞 分成两部分,分别悬浮在含牛脑垂体提出物和不含牛脑垂体提出物的MB培养基中,以相同的细胞接。
 
  牛垂体提取物种密度 (50000 c m 2,在相同条件 (37℃ , 5%CO 2) 下 , 进行无血清培养。结果与讨论,继Green等,以3T3细胞为滋养层成功地培养了人角朊细胞之后,Boyce 等,采用无滋养层,无血清培养技术,在体外成功地培养了人表皮角朊细胞,并由此而开发出角朊细胞无血清培养 基MCDB153。此培养基中钙离子浓度较低 (0106mm o l L ) 角朊细胞在此培养基中呈现出基底细胞形状,以单层方式向外生长,不能成层,细胞之间缺 乏桥粒连接,不能形成表皮片。将体外分离的角朊细 胞接种在塑料培养皿上,在MB培养液中培养,4h 后,角朊细胞开始贴壁 , 24h 后 , 大部分贴壁,72h 后 , 可见到角朊细胞能以单个细胞为克隆 , 以单层形 式生长。10d 左右长满单层 ,可传代。与原代培养的 角朊细胞相比 , 传代后的角朊细胞更易贴壁和增殖。培养7d长满单层,可再行传代。

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